t载体克隆的实验原理（克隆载体的概念）

大家好，小豪今天来为大家解答t载体克隆的实验原理以下问题，克隆载体的概念很多人还不知道，现在让我们一起来看看吧！

1、实验原理重组质粒的构建T质粒载体重组的DNA分子是在DNA连接酶的作用下，有Mg2 、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。

2、T载体是一种克隆载体，也就是用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体，它不能大量表达。

3、T克隆的原理是基于常规PCR反应中所使用Taq聚合酶能够在PCR产物的3‘末端非特异性添加一个A,这样实际上常规PCR产物都含有3端突出一个A的粘性末端.基于这个原理,常规的线性T－克隆载体（PUC18和PUC19等）在其3’末端添加一个。

4、TA克隆方法（OriginalTACloningKit）把PCR片断与一个具有3‘-T突出的载体DNA连接起来的方法。

5、抽提大量质粒贮存,随时制备T载体使用,增加了克隆的稳定性.该T载体克服了一般T载体质量不稳定,费钱,克隆效率低,假阳性高的缺点.使用构建的T载体完成了10个基因的克隆,结果表明重组效率达到了90％～100％。.

本文到此讲解完毕了，希望对大家有帮助。